一、外泌体的来源早期研究认为，外泌体通过转运必须内吞体分选复合物识别其内装载的泛素化蛋白而形成内腔囊泡，并进一步形成多囊泡体，形成的多囊泡体与质膜融合后将外泌体释放至细胞外，但外泌体的具体形成机制目前仍然不是十分清楚。根据现有研究结果推测，不同类型的细胞形成外泌体的过程可能大同小异。二、外泌体的分类三、外泌体的功能 一、外泌体的定义 外泌体(exosome)是一种由各种活细胞通过内吞一融合一外排等一系列生物学机制产生,并通过主动分泌方式排出细胞膜外的脂质双分子层膜性囊泡，其本质是脂质双分子层，直径为30~100nm,密度为1.15~1.19g/mL。外泌体形成过程主要包括早期核内体的形成和晚期核内体的形成两个过程。晚期核内体也称为多泡体,最后从细胞膜释放出来。外泌体的细胞来源及其内部的蛋白质含量决... 免疫捕获发是一种以抗原、抗体中的一方作为配基亲和吸附另一方的分离方法。外泌体表面有其特异性标志物，因此用包被抗标志物抗体与外泌体孵育后结合，即可将外泌体吸附并分离出来。原理外泌体表面带有特殊的膜蛋白质，如CD9，CD63，CD81, CD82、膜联蛋白（Annexin）、Alix、EGFR和上皮细胞粘附分子（EpCAM）等，这些蛋白质与固载于不同基质上的同源抗体特异性结合，进而实现外泌体的分... PEG为常用的多聚物，是一种无电荷的线性分子结构的多糖，为乙二醇的聚合物，有较强的脱水作用，可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀，早先应用于蛋白质、核酸、噬菌体等的分离，现在也被用来沉淀外泌体。 通过增加离心速度逐级沉降或使用特定的介质使外泌体悬浮于离心管中固定位置，从而达到外泌体分离、浓缩、和提纯的的目的。离心法主要可以分为3种方法：1）超速离心法；2）密度梯度离心法；3）蔗糖重水垫法 由于方法学的限制，外泌体的高效提取和表征鉴定目前仍然是个挑战。无论是经典超速离心法，还是商用的各种试剂盒法，都无法完全去除各类脂蛋白、乳糜微粒及蛋白聚合物等物质，从而严重干扰后续研究。外泌体领域的权威专家Thery在2018年美国癌症研究协会年会上发表了演讲，她认为即使采用目前分离纯度最高的超速离心法+密度梯度分离法，分离得到的物质是都是外泌体仍值得商榷。国际细胞外囊泡协会（Internat... 随着下一代测序NGS技术、蛋白质组学及脂质组学在临床上的广泛应用，越来越多的外泌体内含物被发现，其参与机体的作用机制与功能开始受到人们的关注。为了探究外泌体在疾病发生发展过程中的相关机制与功能，人们不断丰富与完善外泌体的研究策略，从而为临床疾病的早期诊断及治疗指明新的方向。近年来研究发现，外泌体所携带的内容物具有重要的生物学意义，尤其是外泌体所包含的核酸、蛋白及脂类等分子已被证实参与肿瘤等重...
2021-11-29
分析前阶段的许多因素都会影响外泌体的回收率。因此，计划好相关实验程序,从而尽可能地增加可报告参数至关重要。(一)细胞分泌的外泌体(1) 从条件培养基中分离和鉴定外泌体前，必须对释放细胞、培养和收获条件进行基本规定,培养和收获条件要做到可复制。例如，传代次数(或悬浮细胞的培养天数)、播种密度、收获密度(及任何相关的融合后特征)、培养体积、培养容器或生物反应器系统、氧气或其他气体张力(如果它们与... |