什么是3D培养？

3D培养是特指将永生化的细胞系、原代细胞系、干细胞或外植体等放在水凝胶中，以模拟细胞体内生长环境的体外培养方法。

3D培养相比传统2D培养有何好处？

尽管2D培养已被用于研究细胞功能和行为的各个方面，但塑料皿容器培养的组织培养物仍与活体组织具有巨大差异。因此，与正常组织相比，2D培养物形态、功能、增殖与基因表达均会发生变化。而细胞置于3D环境内，培养物所呈现出的生物学和生化特征则与在体内观察到的相似。

与3D培养相关的变量有哪些？

与3D培养相关的主要变量是细胞类型、细胞接种密度、水凝胶的组成、水凝胶厚度、水凝胶硬度、细胞培养基的组成以及培养时间。

3D培养有哪些不同的类型？

3D培养的两种主要方法是顶部检测（top assay）和嵌入检测（embedded assay）。顶部检测法中细胞被接种到厚厚的凝胶上，并在上面覆盖一层薄薄的细胞培养基。而在嵌入检测中将细胞重悬在厚厚的凝胶中，并在上面加入培养基。两种方法比较，前者更容易操作，可更好的控制接种密度，能更好的让细胞保留在一个焦平面内分析。

在3D培养中应当使用哪种基质？

基质的选择应该与您希望模拟的环境相对应。基底膜提取物（BME）可支持大多数上皮或内皮来源细胞Ι生长的基板。Ι型胶原蛋白是结缔组织的主要成分，它通常适合静止的细胞，如成纤维细胞和脂肪细胞，以及迁徙的细胞，如肥大细胞、巨噬细胞、单核细胞、淋巴细胞、浆细胞以及嗜酸性粒细胞。

在建立3D培养之前，应当如何培养细胞？

用于3D培养的细胞应该是在2D培养中健康的、活跃分裂的细胞。冻存细胞在复苏后应进行两次或三次传代，每一代不应超过80%的共聚。同时，细胞要利用台盼蓝来评估，且染色率应低于5%。

是否能将类器官从一种基质转移到另一种基质？

强烈建议将提取和扩增类器官的整个过程中使用同一种基质作为细胞培养的标准操作。

类器官培养的建议操作程序是什么？

气液界面（ALI）类器官培养：将悬浮类器官的无细胞层ECM铺到培养基上面以创建气液界面。ALI类器官包括组织基质，它们通常使用Ι型胶原ECM,

沉浸类器官培养：将分离出的上皮干细胞包被到BME2型水凝胶中，并接种到培养皿中部。这些干细胞使用的培养基常需添加Wnt、EGF、Noggin和R-spondin-1（WENR）