康宁 Matrigel matrix 的组成

康宁 Matrigel matrix 是从富含胞外基质蛋白的 EHS 小鼠肿瘤中提取的基底膜基质，其中含有约 60%层粘连蛋白、30% IV 胶原和 8%的巢蛋白。康宁 Matrigel matrix 还含有基底膜聚糖、TGF-ß、表皮生长因子、类胰岛素生长因子、组织纤溶酶原及其他生长因子。

融化康宁 Matrigel matrix 需要多长时间？

产品需要放置于冰上，并在 2ºC-6ºC 的冰箱中或者冷室中过夜融化，蛋白浓度高时可能需要更多时间。

使用康宁 Matrigel matrix 时需要预冷移液管和管子吗？

是的。因为康宁 Matrigel matrix 在 10ºC 以上时会成胶，操作康宁 Matrigel matrix 时，凯发k8官网建议使用预冷的移液管、吸头和管子。

康宁高浓度 Matrigel matrix 用于哪些实验？

康宁高浓度的 Matrigel matrix   matrix 可适用于体内应用研究，如高浓度蛋白可促进肿瘤生长。高蛋白浓度同时可使康宁 Matrigel matrix 注射入小鼠皮下后保持完整，有利于注射的肿瘤细胞和/或血管生成因子保持原位，便于用于原位分析和/或 以后的切除。

如何将康宁 Matrigel matrix 用于 3D 培养？ 怎样制作 3D 胶？ 需要将细胞嵌入到康宁 Matrigel matrix 中吗？

康宁高浓度的 Matrigel matrix 可适用于体内应用研究，如制备厚层包被用于 3D 细胞培养。细胞可以嵌在康宁 Matrigel matrix 中或者接种在康宁 Matrigel matrix 表 面（覆盖法）。

使用 Corning Matrigel matrix 时，需要将移液器吸头和离心管预冷吗？

是的。因为 Corning Matrigel matrix 在高于10℃的条件下即会开始成胶，凯发k8官网推荐操作 Matrigel matrix 时使用预冷的移液管、吸头和离心管。 Corning Matrigel matrix 会快速聚合吗？

Corning Matrigel matrix 在 22℃至 35℃时会快速聚合成胶。

什么情况下，需要使用无酚红 Corning Matrigel matrix？ 对于涉及颜色检测的实验，推荐使用无酚红 Corning Matrigel matrix，如使用荧光 染料或 Drabkins 法计数内皮细胞成管实验。对于子宫内膜细胞培养，也需使用无酚红 Corning Matrigel matrix。 此外，酚红和非甾体雌激素结构类似，有类雌激素效应。在实验动物体内可能具有 干扰内分泌和荷尔蒙代谢的能力。

如何从 Corning Matrigel matrix 中收获细胞？

推荐使用 Corning Dispase 或 Corning Cell Recovery Solution 来收获培养在 Matrigel matrix中的细胞。 Corning Dispase 相比胰酶、胶原酶或其他蛋白水解酶能够更温和有效地获得单细 胞悬液，不会损伤细胞或细胞表面蛋白。对于需要继续接种培养或进行检测的细胞，使用 Corning Dispase 不会产生损伤。此外，Corning Dispase 也可以用于组 织分离。 对于代谢研究和 RNA 抽提，建议在 4℃使用 Corning Cell Recovery Solution 进行非酶反应的细胞收获。因为 Corning Matrigel matrix 中含有痕量的 RNA，进行 RNA 分析时，应设一个 Corning Matrigel matrix（不接种细胞）的对照组。 其它从　Corning Matrigel matrix 中收获细胞的方法：  降低温度至 4℃ - 6℃使 Matrigel matrix 解聚，需要一定的时间并且仅适合 一部分应用。  离心以破坏 Corning Matrigel matrix结构。

1. Corning® Matrigel® matrix包被过的培养皿可以储存多长时间呢？

包被过的培养皿最好当天使用，具体情况取决于实验目的。需要保存的情况下，可在37°C 培养箱中最多存放7天。保存时Matrigel表面需要使用无血清培养基均匀覆盖，保持湿润。  

2. 如何确定Corning® Matrigel® matrix的包被用量？

3. 哪些情况下应该选用薄胶？什么时候用厚胶呢？ 3D培养有哪些应用？

薄胶主要用于辅助细胞贴壁，有利于细胞增殖。如原代细胞培养，需要一层薄薄的蛋白层 辅助，就可以选用薄胶；厚胶主要用于3D细胞培养，如大鼠主动脉组织分化为毛细血管 样结构（Ring Assay），以及进行细胞侵袭实验等；3D细胞培养实验，主要是用于研究 细胞与细胞间的相互作用以及复杂结构，如生物组织等。 详细信息请参阅Corning® Matrigel® matrix使用指导手册。

4. 进行内皮管形成实验，应该选用多大浓度的Matrigel呢？

进行该实验，Matrigel最低浓度应不低于10mg/mL。

5. 所有的Corning® Matrigel® matrix 都可以用于人胚胎干细胞（hESC） 培养吗?

不是的。Corning提供专门用于人胚胎干细胞（hESC）培养的Corning® Matrigel® matrix （货号为 354277）。该产品生产过程中经过严格的质量监控，可以保证hESC培养的一致性、可重复性和高度可靠性。在干细胞培养领域知名的STEMCELL Technologies公司， 也正是选用此产品包被的培养板，用于生产其mTeSR®1产品。hESC在mTeSR1培养体系 中可以维持未分化状态，保持标准形态并正常表达表面标志物。 此外，Corning BioCoat™ Matrigel matrix提供预包被产品，如预包被的6孔板（货号 354671）。该系列产品不同批次间的Matrigel包被浓度一致，方便用户使用；用于hESC 培养，可以维持干细胞应有的自我更新能力和多能性。如果使用非专门用于hESC培养的 Corning® Matrigel® matrix培养hESC，细胞培养效果可能不理想，不推荐用户使用。

6. 做细胞侵袭实验，需要使用多少Corning® Matrigel® matrix进行包被？ 包被24孔通透性支持物，推荐每孔使用0.1 mL (浓度200-300 μg/mL) ，Corning® Matrigel® matrix货号为354234, 354230 。

7. Corning® Matrigel® matrix的最低成胶浓度是多少？ 不同的实验目的需要不同的Matrigel浓度，用户应该根据具体的实验需求确定。Corning® Matrigel® matrix最低成胶浓度为 3 mg/mL。稀释时不要简单进行体积倍比稀释，不同批次 间的Matrigel浓度有差异，应该根据最终工作浓度 (mg/mL)算出需要加入的稀释液体（如 PBS或无血清培养基）的量。用于体内研究的Matrigel，为了避免成胶不完全，最终工作 浓度不应低于 4 mg/mL。

8. Corning® Matrigel® matrix胶块在体内可以维持多长时间？

基质胶胶块可以在体内维持至少一周的时间。

9. 怎样稀释Corning® Matrigel® matrix?   

使用冰上预冷的无血清培养基或者PH 7.4的PBS。

10. 应该如何对Corning® Matrigel® matrix移液操作?

推荐使用预冷的移液器或者注射器操作，移液管、枪头同样需要预冷。吸液时不要触及瓶子底部；分液时切忌过快、用力过猛。如果使用移液管（Pipets），需要分液5mL时，应该吸取6mL，分液到移液管内仍有1mL时即停止；如果使用自动移液器（Pipetman），按压到第二档位吸液，然后按压到第一档位进行分液。

11. 为什么我的Corning® Matrigel® matrix很粘稠？

基质胶的蛋白浓度越高，胶体越粘稠。如果浓度高于13.0 mg/mL，基质胶会显得非常厚 重。Corning® Matrigel® matrix基质胶产品在未稀释前都会比较粘稠。 粘稠的高浓度Corning® Matrigel® matrix(Corning® Matrigel® matrix HC)不稀释也可以直接使用，如用于培养肿瘤细胞和/或血管生成因子，注射于小鼠体内后，细胞可以保持原位，便于原位分析和/或以后的切除；或者稀释后，按照标准浓度的Corning® Matrigel® matrix产品使用方法使用，具体稀释浓度根据实验需求确定。 除因为产品本身浓度高而粘稠外，基质胶的状态还与运输过程中温度的变化和储藏条件有 关。整个运输过程中必须使用干冰冷藏。如果储藏Corning® Matrigel® matrix的冰箱带有自动除霜功能，冰箱除霜过程中升温，可能使基质胶成胶。所以，切忌将Corning® Matrigel® matrix储藏于此类冰箱中。 为保证Corning® Matrigel® matrix的使用效果，冻融次数应该尽可能减少。拿到新的 Corning® Matrigel® matrix后，请按照单次用量进行分装。每次融化操作，Matrigel基质胶 都应该放置于冰上。如果Matrigel基质胶在成胶状态被冻住，再次融化时将不能成恢复液 体。

12. Corning® Matrigel® matrix可以诱导ES/iPS细胞分化吗？

可以的，已经有凯发k8官网相关的文章表明 Corning® Matrigel® matrix可以用于ES/iPS细胞的分化研 究。  

13. 为什么Corning® Matrigel® matrix在37°C 成胶，而在4°C 时却呈液体状态？

Corning® Matrigel® matrix是一种从小鼠骨肉瘤中提取的重组基底膜， 新鲜提取的原料中 主要包括以下成分：层粘连蛋白，IV型胶原, 巢蛋白，基底膜聚糖、表皮生长因子、类胰 岛素生长因子及其他生长因子。这些蛋白构成了Matrigel的基本结构。在22℃-37℃温度条件下，大分子间的共价键可以结合，促使Matrigel形成凝胶。而在低温条件（如4℃）下， 由于没有足够的能量促使共价键结合，所以Matrigel呈现液体状态。

14. Corning® Matrigel® matrix可以反复冻融吗？

建议用户第一次融化后按照单次用量进行分装，保存。

15. 为什么细胞没有贴壁？Matrigel 也脱落了？

首先需要检查细胞的接种浓度是否过高，Corning Matrigel的用量应等同于细胞培养体系 中培养基的用量。如果Corning® Matrigel® matrix被稀释到过低的浓度，形成的胶体容易 从组织培养器皿表面分离。

16. 未稀释的Corning® Matrigel® matrix中出现的沉淀应该怎么样处理？

4°C 下低速离心，去除沉淀物 。

17. 未使用完的Corning® Matrigel® matrix应该怎样保存的？

与细胞培养基或缓冲液混合过但未使用完的Corning® Matrigel® matrix，不建议保留再用。

18. Corning® Matrigel® matrix中含有 DNA和/或RNA吗?

是的。Corning® Matrigel® matrix没有经过DNA酶或RNA酶消化处理，可能会含有痕量的 DNA、RNA。

19. Corning® Matrigel® matrix中有血管内皮生长因子（VEGF）和金属蛋白酶 （MMPs）吗? 在标准浓度的Corning® Matrigel® matrix中含有 5.0-7.5 ng/mL 的血管内皮生长因子 （ VEGF），GFR Corning® Matrigel® matrix中VEGF含量为1.0-1.5 ng/mL。另外，可能 含有老鼠肿瘤细胞来源的痕量金属蛋白酶（MMPs）。

20. Corning® Matrigel® matrix中有 LDEV吗?

没有的。Corning® Matrigel® matrix经免疫方法及PCR方法检测，并不含有乳酸脱氢酶增高 病毒（LDEV）或者乳酸脫氫脢增生病毒（LDHV） 。此外，凯发k8官网还针对小鼠群体及肿瘤 来源筛查了其他种类的病毒。详细信息请参见产品说明书。

21. Corning® Matrigel® matrix中有尿素吗?

没有的。在Corning® Matrigel® matrix生产准备过程中使用过尿素，后续流程中经过透析 方法已经去除了。

22. Corning® Matrigel® matrix中使用的什么缓冲液？

低葡聚糖 DMEM (1g/L)，其中包含 50 µg/mL 庆大霉素。

23. Corning® Matrigel® matrix 中含有纤维连接蛋白（Fibronectin）吗？

是的，通过使用Western Blot检验，凯发k8官网在Matrigel matrix中发现了微量的纤维连接蛋白 （Fibronectin）

24. Corning® Matrigel® matrix 中含有玻璃体结合蛋白（ vitronectin）吗?

某些 EHS组织中可能含有微量的血液，因此Corning® Matrigel® matrix中可能会有痕量的 玻璃体结合蛋白（Vitronectin） 。

25. Corning® Matrigel® matrix 中还有什么别的物质？

Corning® Matrigel® matrix 中还可能含有浓度小于 0.02%的三氯甲烷，以及肿瘤细胞的产生的其 他未知蛋白或分子。

26. 提取过程会引起层粘连蛋白变性吗？   

不会的，不会引起层粘连蛋白变性。

27. Corning® Matrigel® matrix 可以储存在 -70℃吗？

是的。Matrigel matrix 可以储存在-70℃。建议客户将整瓶的 Matrigel matrix 进行分装，储存 于聚丙烯或其他可以耐受超低温条件材质的小管中，方便保存和使用。

28. Corning® Matrigel® matrix 的折射率是多少？

20°C 条件下，Corning® Matrigel® matrix 的折射率是 1.3406 到 1.3407，相对折射率为 1.0056（同等条件下，水的折射率为 1.333）。

29. Corning® Matrigel® matrix 会有自发荧光吗？   

Corning® Matrigel® matrix 是一种蛋白混合物，经过透析处理后溶解在 DMEM 培养基中。为防止微生物污染，培养基中添加了庆大霉素。所以 Corning® Matrigel® matrix 可能引发荧光的组分包括其中的蛋白质成分，维生素成分以及庆大霉素（氨基糖苷类抗生素）。如果需要使用荧光检测细胞生长状态，建议使用者建立对照实验，在所需要的波长条件下进行对比，以便排除背景荧光。

30. 使用 Matrigel 培养的细胞，如果需要进行切片或者免疫组织化学及免疫荧光检验，该怎样固定呢？如何避免解聚？

可以使用 2%浓度的多聚甲醛进行固定。为避免固定后出现解聚的情况，可以加入 1%浓度的戊二醛。戊二醛作为固定剂，常用于电镜观察。如果用户需要进行免疫荧光检验，加入戊二醛后，会出现明显的背景荧光。为了解决这一问题，凯发k8官网建议用户在固定之后，使用 NaBH4 进行淬灭。NaBH4 极易气泡，进行该步骤时，必须在水平操作台上小心操作，避免晃动，尽量减少气泡的形成。另外，用户也可以尝试使用较低浓度的戊二醛进行固定，如 0.1%到 0.5%， 浓度越低，背景荧光信号越少。