凯发k8官网

小鼠脾脏淋巴细胞提取方法(使用MP LSM 0850494X)

实验准备:10ml注射器活塞、70um细胞筛网或尼龙网、50ml(或35mm培养皿)和15ml离心管、细胞计数板、移液管、加样枪、水平离心机(带g,能调为Break off, 能调温度)、无菌刀片、无菌剪刀和镊子、75%的乙醇、生理盐水、DMEM、PBS 或RPMI-1640液


实验步骤:

1.断颈处死小鼠,浸泡于75%的乙醇中,10min;

2.在超净台中取出小鼠脾脏(无菌操作);

3.将70um细胞筛网置于50ml离心管,将分离脾脏置于筛网,用剪刀剪碎脾脏,用10ml注射器活塞研磨,边研磨边加入RPMI-1640冲洗,约10ml;

4.将5ml的RPMI-1640细胞悬浮液转入到15ml离心管;400×g, 3min,弃上清;

5.用10ml的RPMI-1640重悬细胞,按照4的步骤离心,弃上清;

6.用4ml的RPMI-1640重悬细胞

7.上下颠倒LSM,使其混匀;

8.取3ml LSM于15ml离心管;

9.小心将4ml脾脏细胞液慢慢加在LSM上;不要将细胞悬液和LSM液面层打破;

10.400×g(brake off)室温离心30min;

11.将最上层的透明血浆抽吸至淋巴细胞层以上2-3mm

12.抽吸淋巴细胞层和很少量LSM层,并将其转移到离心管中。在离心管的淋巴细胞层中加入等体积的RPMI-1640,室温以160-260离心10min;弃上清(底层未见明显细胞)。

13.重复洗涤一次,并用培养基悬浮至适当浓度,待用。