3.3 Luminex® Assay多因子分析

R&D Systems® Luminex® Assay与 High Performance Assay的区别 总的来说，Luminex® Assays和Luminex® High Performance Assays的灵敏度是相似的。Luminex® High Performance Assays由 精选的分析物组成不同的panel，这些panel经过了严格的测试和验证。 Luminex Assay有三百多种因子可供选择，可以让研究者组合出自己独有的panel，是最具有灵活性的产品。适用于大样品的初筛。 High Performance Assays中提供的稀释剂已经过优化，使在同一panel上的分析物均能得到最佳结果。High Performance Assays 是R&D Systems®提供的最精确、重现性最好、准确度最高的Luminex®检测试剂盒。Human Luminex® High Performance Assays 能够提供质控品，同时它也是市场上最好的多因子液相芯片产品，能够与同指标Quantikine® ELISA结果相比较。

是否有Luminex试剂盒操作演示视频？ 您好，我司官方微信公众号RnDSystems（互动达人-操作视频）及Bilibili（UID:509961500）上均有相关的视频。

客户一个Luminex试剂盒做80个样本为何稀释液不够？ 每个Luminex试剂盒包含1个96孔板。Luminex试剂盒开发时，为了实验的严谨，凯发k8官网默认每个标准曲线点及样本为复孔上样，所 以一个试剂盒的稀释液足够支持40个样本。若需要稀释80个样本，客户在样品配制时需要进行相应的调整，避免不必要的样品及 稀释液浪费，比如当样本需要1：1进行稀释时，可以30ul样品与30ul稀释液混匀，而不用50ul样品与50ul稀释液混匀。但是一般情况下，为了减少误差提高实验的准确性，凯发k8官网建议客户做复孔。

如何定制Luminex Assays以及我如何知道不同分析物间能否兼容? 您可以使用我司的Luminex®定制系统Luminex® Assay Customization Tool (//www.rndsystems.com/cn/luminex/analytes) 进行在线定制时，若您选择的分析物放置在一起可能出现不兼容情况，则不会生成在同一个试剂盒中。若分析物组合针对特定样 本存在不兼容情况，则会出现黄色提示框，若有不清楚的可以联系凯发k8官网的销售及技术进行咨询。

Luminex 提供的板子及试剂是否是一次性的？ Luminex®一次实验可以不用掉整块板。如果只使用部分孔，凯发k8官网建议在实验时覆盖未使用的部分，因为此板井不是可拆卸的条 状，所以需要覆盖以避免污染。并且已使用的孔不建议重复使用以避免交叉污染。

R&D Systems® Luminex系列产品质控（QC）内容包括哪些? Luminex High Performance系列是目前市场上Luminex 最准确试剂盒。Luminex Assay系列达到同行业标准。 QC一般测回收率、线性稀释度、天然蛋白检测准确度、检测特异性，整体试剂盒检测准确度等。通常High Performance系列产 品的说明书中会有各指标的QC数据，常规Luminex Assay不提供具体指标的QC数据。

Luminex ® High Performance Assay不同panel中的分析物能否一起使用? Luminex® Performance Assay的每个panel均针对panel内的分析物组合进行了缓冲液和试剂的优化，会存在同一个分析物在不同 panel中出现的可能，不过需要注意的是，不同Panel中分析物的标准曲线范围，对应样本及稀释建议可能不同。因此，不同的 Luminex® Performance Assay中的分析物不能组合使用。 Base kit只包含针对特定panel中分析物的标准曲线及缓冲液，与其他panel中的分析物不兼容。

R&D Systems® Luminex 试剂盒一般测的是可溶性蛋白吗？ 是的，因为检测的样本类型(血清、血浆及细胞上清液)一般含有可溶性蛋白，对于组织或者细胞裂解液样本，凯发k8官网的抗体也有可能 识别其中的膜蛋白，但是这方面凯发k8官网没有测试过。

R&D Systems® Luminex检测与ELISA检测，样本的处理是否有区别？ 两类试剂盒检测样本的处理方法大致相同，具体的样本处理方法在说明书中有详细描述。Luminex验证过的样本类型有限，主要是细胞上清液，血清及血浆，而不同ELISA试剂盒可能验证过更多的样本类型（尿液，乳液，唾液等），在针对未经验证的样本建 议客户进行掺入回收及线性稀释实验验证系统的准确性。

Luminex实验出现珠子（beads）数量低于50，可能的原因和解决方式？ 珠子（beads）数低的可能原因有： 1.样品粘稠，未有效稀释。 解决方法：测定前，将血浆样品解冻，16,000 xg离心4分钟,或更长。用校准稀释液（Calibrator diluent）进行建议的稀释。 2.收集时微球未悬浮 读板前立即震荡微球溶液1min以重悬微球。 3.微球聚集或成团 解决方法：将微球混合浓缩液进行1000 x g离心30s，制备1X微球混合液前进行轻柔涡旋。 4.洗涤时，磁珠未落到微孔板底部 确定磁力架正确的结合在微孔板上, 洗板时磁力架应置于微孔板底部，弃去洗涤液前应静置1min。不要吸干，以防止磁珠丢失。 5.仪器未正确校准 解决方法：每周进行仪器校准，在实验当天使用验证试剂盒确定仪器功能运行正常。校准及验证见仪器使用说明。 6.微球收集数设定不正确 解决方法：设定微球收集数（events/microparticle）为50，保证微球数量收集充分以获得统计学准确结果。 7.针孔堵塞，针孔过高或者过低导致没有完全将beads吸到 解决方法：清洗针孔或者调整针的高度至合适位置，清洗过程请参考：//www.rndsystems.com/cn/resources/faqs/luminex-instrumentation 8.系统超时(针对Luminex® 100/200™ 和FLEXMAP3D™) 解决方法：在使用基于流式细胞术的仪器如Luminex® 100/200™时，如果仪器超时(timed-out)，请停止运行。确定进样针的高度 并选择正确的微球类型，重新读板。因为仪器指定收集50个微球，超时可能导致针对某个或多个分析物微球计数不够。MagPix® 仪器针对每个因子的读取时间固定，不会有超时提示功能。

3.4 Proteome Profiler Array固相抗体芯片

固相抗体芯片（Proteome Profiler Array）的原理是什么？ 固相芯片是利用抗原抗体结合原理，在PVDF膜上包被捕获抗体，配合相应的检测抗体，及缓冲液，显色液体系，构建的抗体芯片 检测系统。可同时检测样品中15~119种蛋白。结果类似多个Dot Blot，但具有很高的重复性和灵敏度。

固相抗体芯片是否可以定量？ 不可以，固相抗体芯片是用来筛选样本中是否同时表达多项因子，如果使用不同的膜检测相同的样本和部分相同的因子，所测得 的点的亮度有可能是不一样的，因为亮度的多少还取决于抗体与靶标因子的亲和力。

参考点（Reference Spots）有什么作用，能否作为内参？ 在膜上的左边上下角各有一对参考点，在膜上的右边上角有一对参考点，可以根据其布局对膜上的点（靶因子）进行定位，避免 搞反方向。 这些参考点内包被了生物素化的蛋白，会与Streptavidin-HRP反应显色。需要注意的是，参考点内蛋白及其敏感，仅供实验指示 用，并不能作为内参使用。

如何检测固相抗体芯片？ 步骤简述： Step1 样本准备：细胞/组织裂解，总蛋白定量 Step2 样本/芯片反应：芯片在封闭液中封闭1小时后，与样本2-8℃过夜孵育。 Step3 与捕获抗体孵育：结合了抗原的芯片，与捕获抗体室温孵育2h。 Step4 加入化学发光试剂反应1分钟 Step5 按照X-光片曝光/凝胶成像/近红外成像的方法，进行芯片的成像和数据分析。详情可以参考我司官方微信公众号RnDSystems （互动达人-操作视频）及Bilibili（UID:509961500）上相关的视频。

如何分析固相抗体芯片的结果？ R&D Systems® 提供了Quick Spots 图像分析软件专用于固相抗体芯片的结果分析（//www.wvision.com/QuickSpots.html ）。 Quick Spots包含了固相芯片的专用模板，相比其他软件更方便快捷。请注意此软件需要购买，免费试用版只能得到结果不能导出。 此外，客户也可以用Quantity One或者Image J 软件，自行建立模板对各孔的灰度值进行分析。