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密度梯度离心法（碘克沙醇）提取细胞培养上清液中的外泌体


   密度梯度离心法提取细胞培养上清液中的外泌体


制备不连续的碘克沙醇梯度
↓
从管底向上依次加入稀释好的碘克沙醇溶液
3 mL 40%(w/v)、3 mL 20%(w/v)、3 mL 10%(w/v)和2.5 mL 5%(w/v)
↓
外泌体溶液加到梯度的顶部，在4℃条件下,100 000×g离心18 h
↓
将离心后的液体从上向下开始分馏，根据1 mL/管，分成13管
↓
在4℃条件下，100 000×g 离心60 min，取沉淀
↓回收外泌体层，用2 mL PBS重悬,4℃，100 000×g再次离心2.5 h
↓PBS重悬沉淀物即为纯化的外泌体


附:制备40%(w/v)、20%(w/v)、10%(w/v)和5%(w/v)梯度碘克沙醇溶液，配制方法见表2-1。


4种梯度碘克沙醇溶液的配制比例


渐变层
密度(g/mL)
体积(mL)
碘克沙醇(%)
1
1.223
3
40
2
1.127
3
20
3
1.079
3
10
4
1.054
2
5